生物制品(包括重組蛋白藥、抗體藥、疫苗等)多是使用非人源的連續(xù)傳代菌株或細胞株來表達生產(chǎn),即使經(jīng)過嚴(yán)格的純化工藝仍然容易在成品中殘留宿主細胞的核酸片段。這些外源性核酸殘留可能存在諸多安全隱患(如感染性、致瘤性、免疫原性和致突變性)。

《中國藥典》(2020年版三部通則3047)規(guī)定:細胞基質(zhì)生產(chǎn)的生物制品DNA殘留量不高于100 pg/劑;細菌或真菌基質(zhì)生產(chǎn)的制劑DNA殘留量不超過10 ng/劑。
《中國藥典》將定量qPCR法作為生物制品宿主殘留DNA檢測的標(biāo)準(zhǔn)方法之一。定量qPCR法具有序列特異性高、靈敏度高、重現(xiàn)性好,定量檢測等優(yōu)點,目前已經(jīng)成為宿主細胞殘留DNA檢測的主流方法之一。
TIANGEN聚焦生物制藥上游環(huán)節(jié),結(jié)合自身在國內(nèi)核酸提取和純化領(lǐng)域多年積攢的豐富經(jīng)驗,自主研發(fā)推出生物制品宿主細胞殘留DNA檢測整體解決方案:
● 磁珠法宿主殘留DNA提取試劑盒(HD101)
● Vero殘留DNA檢測試劑盒(探針qPCR法)(HD201)
● CHO殘留DNA檢測試劑盒(探針qPCR法)(HD202)

適用于生物制品樣本的前處理,可用于分離純化高質(zhì)量宿主細胞殘留DNA,并可與其他宿主殘留DNA檢測試劑盒配合使用。1. 操作靈活:可手工提取或搭配TGuide S32 Pro全自動核酸提取純化儀使用
2. 通用性強:可滿足高/低pH、高鹽、高蛋白等復(fù)雜樣品的核酸提取
3. 準(zhǔn)確靈敏:回收率在70%-130%,可純化富集低至fg級別的DNA
4. 快速高效:操作步驟簡單,1h即可完成整個流程
優(yōu)異的加標(biāo)回收率表現(xiàn)
圖2.模擬樣本的提取結(jié)果
所有模擬樣本計算得到的加標(biāo)回收率均介于70%-130%之間,符合《中國藥典》要求(50% - 150%)。
實驗例2
圖3. 3款宿主細胞DNA殘留提取產(chǎn)品的實驗結(jié)果對比
三款提取產(chǎn)品的加標(biāo)回收率均滿足《中國藥典》的要求(50%-150%),HD101相比競品,在2個標(biāo)準(zhǔn)品濃度下的加標(biāo)回收率值更高,CV值更穩(wěn)定。
探針qPCR法檢測試劑盒
目錄號:HD201, HD202

| Vero殘留 DNA檢測試劑盒 目錄號:HD201 點擊圖片查看詳情 |
CHO殘留 DNA檢測試劑盒 目錄號:HD202 點擊圖片查看詳情 | 
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適用于通過qPCR方法檢測各種生物制品(中間品、半成品和成品)中宿主細胞殘留DNA的含量。
1. 檢測線性范圍廣:Vero細胞**檢出限至1 fg,CHO細胞檢出限至5 fg
2. 檢測準(zhǔn)確,重復(fù)性好:選用國家標(biāo)準(zhǔn)品,試劑批間、批內(nèi)穩(wěn)定
3. 專屬性強:受其他物種干擾值低,無交叉反應(yīng)
4. 耐用性強:DNA碎片化不影響檢測結(jié)果;儀器通用性強
5. 操作簡單快速:1h內(nèi)即可完成qPCR驗證
兩款試劑的qPCR結(jié)果線性化良好,線性范圍廣,擴增效率接近****。
圖4. HD201和HD202對目標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)品的qPCR擴增曲線
兩款試劑檢測目標(biāo)宿主細胞DNA的qPCR擴增曲線重疊性高,反應(yīng)體系專屬性強,抗外源物種基因組片段干擾能力強。
圖5. 外源基因組干擾下HD201和HD202的qPCR擴增曲線
DNA碎片化處理下檢測結(jié)果依舊準(zhǔn)確
兩款試劑的qPCR擴增曲線和標(biāo)準(zhǔn)曲線同對照相比,重疊性都很好,定量檢測結(jié)果不受影響。
圖6. HD201和HD202對片段化Vero和CHO DNA的qPCR擴增曲線
與同類競品相比,HD201對于超低豐度Vero DNA的定量qPCR結(jié)果更準(zhǔn)確,CV值更穩(wěn)定。
圖7. 2款檢測產(chǎn)品對Vero DNA標(biāo)準(zhǔn)品定量檢測的結(jié)果對比
與同類競品相比,HD202對不同濃度CHO DNA樣本的qPCR結(jié)果都表現(xiàn)出更加良好的穩(wěn)定性和準(zhǔn)確性。
圖8. 3款宿主殘留DNA檢測產(chǎn)品對CHO DNA標(biāo)準(zhǔn)品定量檢測的對比結(jié)果
后續(xù)TIANGEN還將陸續(xù)推出E.coil、人源細胞系等宿主細胞的檢測產(chǎn)品,敬請期待。